常用的病毒基因传递载体包括逆转录病毒（RV）、腺病毒（AdV）、腺相关病毒（AAV）、慢病毒（LV）和单纯疱疹病毒（HSV）。其中，AAV属于细小病毒科，是其中最小的单链和无囊膜DNA病毒，目前已发现的血清型有11种。在所有不同血清型的AAV中，重组AAV-2是最常用的一种，它可以通过辅助病毒或Cell Biolabs提供的AAV Helper-Free System来体外生产出高滴度的重组病毒。AAV-2可以感染分裂细胞和非分裂细胞，并能在人类宿主细胞中维持，具有一定的基因稳转潜力。由于AAV-2是一种天然缺陷型病毒，需要在反式结构中提供若干因子才能进行生产性感染，因此被公认为最安全的病毒载体。近年来，利用DNA重组技术开发了一种新型的载体AAV-DJ，是从8种不同血清型AAV重组而来的一个混合衣壳，使其能在各种不同细胞和组织中都具有显著较高体外感染效率的载体。重组的AAV-2和AAV-DJ病毒都可通过CsCl梯度超离法、碘二醇密度梯度超离法或Cell Biolabs的AAV纯化试剂盒来纯化。

   利用病毒载体来转导基因必须要准确地测量病毒滴度。传统检测AAV滴度是通过DNA斑点杂交或类似方法来定量AAV基因组拷贝数（GC）。然而这些方法耗时耗力，且稳定性不佳。对于已经高度纯化的病毒样品，也通常用其在260nm的吸光度来估算病毒粒子总数，但这种方法不适用于未纯化的病毒上清，因为其中的杂质成分会影响260nm的光吸收度。

   太阳集团tcy8722代理的Cell Biolabs提供了一种快速全面的用于检测纯化后的AAV滴度的试剂盒QuickTiter™ AAV Titer ELISA Kit。该试剂盒包含一个96孔板和足够检测96个样本的试剂，包括已灭活的AAV标准品，通过标准曲线能够计算出样品中纯化后的AAV滴度。该试剂盒检测灵敏度为6.25×108 GC/mL，能够检测AAV-1，AAV-2，AAV-3，AAV-5，AAV-6，AAV-8，AAV-9，AAV-10，AAV-DJ和AAV-DJ/8多种血清型的AAV滴度，并且适用于所有表达系统生产的AAV。

检测原理

   AAV衣壳是由VP1、VP2和VP3三种蛋白质混合构成，平均每一个病毒粒子中包含60个VP分子，其比例为5 VP1 : 5 VP2 : 50 VP3。试剂盒中提供的96孔板已预包被了可以结合三种VP蛋白的捕获抗体，当AAV样品或标准品加入到96孔板中，其AAV衣壳蛋白就会与捕获抗体结合。经过孵育和洗板等步骤后，再分别加入AAV VP衣壳抗体和HRP标记的二抗，而未结合的抗体将被洗脱下来。经底物显色后，测定450nm处的吸光度，最后通过AAV标准曲线计算未知样品中AAV衣壳蛋白浓度，进而计算出样本中AAV滴度。

下图展示了AAV滴度检测试剂盒的标准曲线结果。

产品特点

• 通过检测纯化后的重组AAV衣壳蛋白来确定AAV滴度；
• AAV定量结果由标准酶标仪读取；
• 试剂盒中提供灭活的AAV标准品；
• 适用于多种血清型AAV滴度测定，包括AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-5, AAV-6, AAV-8, AAV-9, AAV-10, AAV-DJ and AAV-DJ/8

产品信息

Cell Biolabs公司坐落于美国加利福尼亚州圣地亚哥市，一直致力于开发生命科学研究领域的技术和工具，并将所开发的创新性技术成果商业化。Cell Biolabs孜孜不倦的完善产品，以期使细胞功能和疾病机制研究达到新高度。Cell Biolabs公司的产品独具特色并且处于行业前沿水平，全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用。太阳成集团tyc234cc是Cell Biolabs中国一级代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。如您对上述产品感兴趣，欢迎拨打太阳集团tcy8722客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多信息。

引用文献

1. Rabinowitz, J, and Samulski, R. J. (1998) Curr. Opin. Biotechnol., 9, 470-475.

2. Summerford, C., and Samulski, R. J. (1999) Nat. Med., 5, 587-588.

3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

4. Sonntag, F., Schmidt, K., and Kleinschmidt, J.A. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A., 107, 10220-5.